安捷伦色谱技术小讲堂005--峰拖尾原因分析（下）

峰拖尾原因分析（下）

峰拖尾（Peak tailing）是液相色谱分析中的最常见问题之一。峰拖尾可以引起分离度降低，灵敏度减弱，精密度和定量变差。引起拖尾的因素有很多，昨天我们讲了四大方面，今天继续讲完，还可以考虑以下五个方面原因。

五、进样体积太大或浓度太高

当进样量超过柱子的容量，样品峰会呈现拖尾，严重会出现三角峰。由样品过载引起的峰拖尾的，解决方案就是减少进样量，如图6。这种问题一般在使用小体积色谱柱是表现更为明显，所以色谱柱方法从常规250mm或150mm长色谱柱转化到体积较小的快速分析柱时，进样量要按照柱体积的减小的比例而减小。

图6

六、死体积

接头连接不正确

如果色谱柱在使用过程中发现每个峰的峰形都出现问题，要考虑是否有大的死体积。先考察是否有连接问题

管线可能太长或太短——这种情况可能导致渗漏或峰拖尾/分裂，如图 7所示。如果管线太长，密封圈位置不当，将发生渗漏。如果管线推出的距离不够，将会产生一段死空间，形成混合腔，导致柱外体积，使峰形变坏。如果您使用的是不同厂商的色谱柱，一定要确保使用正确的接头，并保证色谱柱末端接头位置正确。

图7

较大的柱外死体积会导致峰形扩展和峰拖尾，图8中对比了增加额外体积为50ul的管线，明显看到所有的峰都拖尾。建议优化系统的连接管线，更换为较短管线；如果使用的是高效柱，将内径 0.18 mm 的绿色管线换成内径 0.12 mm 的红色管线。

图8

七、色谱柱键合相流失或塌陷

色谱柱键合相流失和柱塌陷通常在谱图上表现出峰形严重拖尾、柱效下降。

如果流动相pH超标或在色谱柱pH耐受范围临界点附近长时间使用，是比较容易造成硅胶填料溶解塌陷。如果出现色谱柱塌陷，您会看到色谱图中的每个峰峰形都会发生变化（峰拖尾、展宽或分叉）如图9，这类问题很难修复，短时间内可以反方向运行，建议直接更换色谱柱。日常使用的过程中注意将温度降低到 40 ℃ 以下，特别是使用高 pH 流动相时；使用高温兼容色谱柱，如立体保护的硅胶柱、混合型柱、聚合物柱、氧化锆柱等。使用特别适合在较高 pH 下操作的高覆盖率或双交联固定相（比如，ZORBAX Extend-C18），或使用聚合物、混合型或氧化锆反相柱。

图9

（a）正常；（b）（c）柱塌陷

八、金属络合作用

某些分析物具有易于与金属进行螯合的结构。筛板或柱壁上的金属可能与其发生相互所用，形成螯合物，表现出明显的拖尾。用磷酸冲洗有助于解决这一问题。

如何肯定峰拖尾是由于金属络合而引起的？只要辨别N或O原子上的孤对电子能否与金属螯合并形成5 或者 6元环。金属络合物是一个普遍被忽视的峰拖尾成因，每个HPLC系统中都存在金属。

图9中经过酸洗后，我们得到了一个较尖锐的色谱峰，化合物 2 的拖尾因子得到了改善。ZORBAX StableBond 柱可以接受1% 的磷酸冲洗，因为该色谱柱采用了在酸性条件下稳定的设计。如果您使用的是Eclipse-XDB、Eclipse Plus，或其它为中等pH 范围而设计的封端柱，酸浓度应减为 0.5%。

图10

九、色谱柱性能下降

在您使用色谱柱时，会用其分析各种目标物、使用各种流动相并分离不同的样品基质，经过长时间的使用，色谱柱会受到这些物质的影响发生一些微妙的变化，从而引起峰拖尾、分叉或保留时间的改变。在使用新色谱柱时保留其测试样品色谱图非常重要，在使用一段时间后进行比较，就能发现性能上的变化。如果分离度下降导致不能进行良好定量，这根色谱柱就应该丢弃并更换了。