安捷伦色谱小讲堂034 - 如何进行液相柱的再生？

上一期我们介绍了反相色谱柱的冲洗方法，这一期让我们以安捷伦液相色谱柱为例介绍一下非反相色谱柱的清洗和再生。

（一）正相硅胶柱再生

对于正相色谱柱只能使用有机溶剂，如果您的色谱柱是传统的分析型 4.6 x 250 mm 色谱柱，那么每种溶剂至少需要用 50mL（相当于20个柱体积）。尝试下列强度递增的溶剂进行清洗：

1. 50% 甲醇∶50% 氯仿

2. 100% 醋酸乙酯

冲洗之后，再用流动相平衡，检查对色谱柱性能是否有一定的恢复。

（二）SCX强阳离子交换柱再生

对于强保留的化合物可以用洗脱能力更强的溶剂清洗，如果是强保留的阳离子化合物，可以用高离子强度的缓冲液清洗（如，1M NaClO4,PH<4),然后用20-30ml纯水冲洗，再用100ml甲醇冲洗。

（三）SAX强阴离子交换柱再生

以下溶剂是清洗这类色谱柱的常用溶剂和顺序，对于4.6x250mm规格的色谱柱，每种溶剂建议使用至少25 mL。

1. 原方法五倍浓度的缓冲液

2. 纯水

3. 0.5 M 磷酸, 用NaOH 调节pH 2.2

4. 纯水

5. 0.1 M Na EDTA, pH 4.0

6. 纯水

7. 甲醇

8. 纯水

（四）Hi-plex色谱柱再生

当色谱柱操作压力升高时，可以用高纯水流动相在操作温度下反向冲洗至少12小时以上， 可以去除色谱柱入口处堵塞的颗粒。

对强保留污染物，可以在流动相中加少量有机改性剂低流速长时间冲洗（体积比小于5%的乙醇或甲醇，或者体积比小于30%乙腈)。

对离子的污染，可以用0.1M的适当的硝酸盐进行低流速长时间冲洗（如果是H型柱则用0.05M的硫酸水溶液）。

（五）GPC色谱柱再生

反方向冲洗色谱柱，冲洗期间不要连接到检测器，采用二分之一的推荐流速进行冲洗（让压力保持在推荐最大值以下）。

大多数GPC色谱柱填料是PS-DVB，选择一种可以溶解色谱柱中污染物的溶剂。冲洗之前需要检查溶剂兼容性。对于粘度较大的溶剂，必须采用较低的流速，观察压力变化不要超过色谱柱上限。

在某些情况下，根据污染物情况，清洗的时候可以加入能与有机溶剂相溶的酸性物（甲酸或乙酸）或碱性物（三羟乙基胺）（检查pH范围）。

如果更多的疏水性污染物被保留，推荐提高温度并使用适当的有机溶剂。 您需要再一次核对色谱柱允许的最大温度范围。

如果仔细地进行清洗，色谱柱不会因为溶剂转换而导致性能下降。详细操作参考说明书。