应用领域:药物筛选,生物制药/仿制药,其他
检测样品:单抗,双抗及细胞因子
检测项目:抗体等效验收标准
参考标准:https://doi.org/10.1016/j.ab.2020.113581
方案标题: Amgen:基于nanoDSF技术的抗体等效验收标准
检测样品:单抗,双抗及细胞因子
检测项目:抗体等效验收标准
应用领域: 制药
方案摘要:
Amgen的研究人员使用各种类型的Biologics对PR进行了评估,并发表在Analytical Biochemistry杂志上。在本文中Amgen的研究人员使用PR建立了等效验收标准。
方案详情:
Amgen的研究人员使用各种类型的Biologics对PR进行了评估,并发表在Analytical Biochemistry杂志上。在本文中Amgen的研究人员使用PR建立了等效验收标准,将其定义为重复性的三倍。对在Site1生产和转移到site2之后生产的抗体进行了对比。蓝色曲线为转移后生产的抗体,红色曲线为转移前生产的抗体(图1)。可以看到不同地点生产的抗体的热变性曲线几乎是相同的,并且相同样品的重复性也非常好。
图1. 转移前后抗体热变性曲线
统计学分析结果显示转移前后的抗体的热稳定性是相同的(表1)。之前我们提到等效验收标准EAC是重复性的三倍,这里使用的EAC是0.6℃,表明Amgen用PR检测到该样品的重复性为0.2℃。
表1. 转移前后抗体统计分析结果
等效验收标准的建立对所用技术的准确性和重复性要求非常高。在本文中Amgen的研究人员使用7种单抗,4种双抗以及2种细胞因子对PR与业内比较认可的金标准DSC进行了对比,结果显示PR检测结果的特异性和准确度完全媲美DSC(图2)。
图2. DSC与nanoDSF单抗,双抗检测结果
PR的重复性以及浓度范围则超越了DSC。不同类型或者不同浓度的抗体重复性均在0.2℃以内(图3)。DSC通常检测浓度为0.2-2mg/ml,Amgen在这项研究中使用的样品浓度跨度为0.05mg/ml-74mg/ml,PR的IgG实际测试结果是5 µg/mL to 250 mg/mL!
图3. 抗体Fab结构域重复检测结果
此外,DSC需要消耗400μl样品,2个小时才能检测完。PR单次运行可检测48个样品,每个样品仅需10μl,70min完成检测,并且最多能同时获得解链温度Tm,聚集起始温度Tturbidity, 实时流体力学半径rH多种参数。可以极大提升检测效率,降低检测成本。