过表达miRNA
miRNA过表达
细胞内载体过表达是常用的过表达miRNA方式。
过表达pri-miRNA序列
如下图,miRNA的过表达载体中有插入成熟miRNA、pre-miRNA及pri-miRNA序列三种形式。其中pri-miRNA(含侧翼序列)的方式由于保留了每个microRNA独自的原始天然双臂结构,效果更好,是应用最为广泛的方法。
启动子选择
吉凯基因的microRNA过表达系统中有CMV启动子(II型启动子)和H1启动子(III型启动子)两种方式供选择。
III型启动子(H1、U6等)具有表达效率高、有效的确定终止位置等优点,成为首选;
II型启动子适用于pri-miRNA序列中有连续的5个T-导致III型启动子(CMV、Ubi等)终止转录的情况。
载体选择
吉凯基因公司有基于慢病毒、腺病毒、质粒等的载体表达系统满足不同实验的需要。
系统编号 | 元件顺序 | 用途 | 真核抗性 | 荧光标记启动子 | 荧光标记 |
GV200 | CMV-MCS-EGFP | 腺病毒载体 | / | CMV | EGFP |
GV202 | hU6-MCS-CMV-EGFP | 腺病毒载体 | / | CMV | EGFP |
GV209 | H1-MCS-CMV-EGFP | 慢病毒载体 | / | CMV | EGFP |
GV210 | CMV-EGFP-MCS(MIR30) | 慢病毒载体 | / | CMV | EGFP |
GV211 | CMV-MCS(MIR30) | 慢病毒载体 | Puromycin | / | / |
GV212 | CMV-RFP-MCS | 慢病毒载体 | / | CMV | RFP |
GV215 | Ubi-MCS | 慢病毒载体 | / | Ubiquitin | / |
GV216 | Ubi-MCS-EGFP | 慢病毒载体 | / | Ubiquitin | EGFP |
GV217 | Ubi-EGFP-MCS | 慢病毒载体 | / | Ubiquitin | EGFP |